传统煎法与现代煎药机制备三黄汤的高效液相色(2)
2.6 精密度试验 精密取同一2.3制备的供试品溶液,在一组相同的测量程序、相同测试地点和相同的色谱条件等情况下,连续重复测量5次HPLC检测,且各色谱峰相对峰面积的RSD<3%,精密度结果最终取大于总峰面积5%的色谱峰相对峰面积RSD平均值1.776%,研究结果显示三黄汤供试品溶液精密度良好。
表2大于总峰面积5%的色谱峰相对峰面积精密度结果峰号(S)第1次第2次第3次第4次第5次平均值RSD(%)..
2.7 稳定性试验 由于固定相的有限稳定性,为确保每一次研究之间的结果误差最小,进行指纹图谱对比研究之前,取同一供试品溶液以确定供试品溶液的稳定性,分别室温放置0、4、8、12、16、24 h后进行HPLC检测,各色谱峰相对峰面积的RSD<3%则说明稳定性良好。本研究稳定性结果显示色谱峰相对峰面积RSD平均值1.843%。见表3。提示三黄汤供试品溶液24 h内稳定性良好。
表3稳定性相似度评价结果项目稳定性1稳定性2稳定性3稳定性4稳定性5平均值RSD(%)稳定性稳定性稳定性稳定性稳定性
2.8 重复性试验 为确保研究的客观性,进行指纹图谱对比研究之前,需要进行短时间内的HPLC连续重复性测试,精密量取6份同一供试品溶液,连续进样,各色谱峰相对峰面积的RSD<3%表示重复性良好。本研究结果显示色谱峰相对峰面积RSD平均值1.911%。见表4。提示三黄汤的重复性良好。
表4重复试验相似度评价结果项目重复度1重复度2重复度3重复度4重复度5平均值RSD(%)重复度重复度重复度重复度重复度
2.9 回收率试验 精密吸取已知含量的三黄汤供试品溶液6份,加入已知浓度的黄芩苷对照品溶液,混合均匀后水浴蒸干,残渣放入10 mL容量瓶中,加70%甲醇定容,进行加样回收试验的检测,根据2.1的色谱条件进行检测并计算加样回收率。结果显示平均回收率99.81%,RSD 1.79%,提示高相液相检测方法所测加样回收率结果可靠。
2.10 样品测定结果 由图1和图2的指纹图谱中可见三黄汤传统煎法和现代煎药机法的指纹图谱存在一定的差异,在同一色谱洗脱梯度下,传统煎法的三黄汤指纹图谱120 min即完成检测,而现代煎药机法制备的三黄汤指纹图谱在131.87 min才完成检测;另外从图谱中可见现代煎药机制备的三黄汤中色谱峰更多,可能与现代煎药机的高压煎煮设备能析出更多共有峰有关。从各自的指纹图谱相似度中和表5可得,10批传统煎法三黄汤的相似度和10批现代煎药机法三黄汤的相似度均高于0.9,其中传统煎法平均相似度为0.971 4,现代煎药机法平均相似度为0.981 6,略高于传统煎法。
图1 10批三黄汤现代煎药机的HPLC指纹图谱
图2 10批三黄汤传统煎法的HPLC指纹图谱
表5 10批三黄汤相似度结果现代煎药机编号相似度传统煎法编号相似度 平均值0.982平均值0.971
3讨论
使用煎法对中药进行加工从而制成汤剂用以治疗疾病在我国已有数千年的历史,最早可追溯至商代伊尹,“伊尹以亚圣之才,撰用神农本草以为汤液”。千年以来汤剂均为中医治疗的主要手段之一,如《备急千金要方》中云:“凡古方治疾,全用汤法……”。《圣济经》中云:“汤液主治,本乎腠理,凡涤除邪气者,用汤最宜”。由此可见汤剂在中医学历史中占据着十分重要的地位。历代医家对中药的煎制方法也均十分重视,李时珍认为:“凡服汤药,虽品物专精,修治如法……火候失度,则药亦无功”。徐灵胎在《医学源流论》曾云:“煎药之法,最宜深讲,药之效不效,全在乎此”。说明古人对煎药已有较多认识,并认为煎煮质量的好坏将极大影响药物的疗效。汉代张仲景曾将煎煮中药的用水分为雨水、千扬水等,同时对药物的各种煎煮方法进行了详细的记载,但到了现代,由于生活节奏的加快,传统煎药方法逐渐被现代煎药机所取代。相对于传统方法,自动煎药机具有其无可忽视的优势。现代煎药机煎煮的时间较短、使用参数客观,煎煮的过程保持密闭,安全卫生,同时有效地减少煎煮人员的工作量[12-13]。
传统煎煮方法与现代煎药机煎煮中药原则上都使用纯蒸馏水。有研究表明,中药煎煮的加水量一般根据中药饮片的质地、煎出物的溶解性来决定,花、叶、全草等质地松散,加水量一般较大,根茎、矿物、贝壳等质地坚硬,加水量较小,一般加水量为所用中药饮片重量的4~10倍[14-16]。而理论上最佳煎煮加水量为中药饮片的吸水量加上煎煮时的蒸发量及患者所需服用的药液量之和。然而在实际煎煮操作过程中,加水量精确仍存在一定困难[17]。本研究最后综合考量饮片煎煮的加水理论量、药物成分析出的平衡浓度、患者及煎药室使用的实际情况,最终选择三黄汤的传统煎法的加水量为药量10倍蒸馏水浸泡30 min,加热煮沸10 min后,转小火煮40 min,加入炙大黄继续煎煮10 min,第2次则以8倍蒸馏水量继续煎煮1次。现代煎药机煎药水量为10倍药物重量浸泡30 min,连续煎煮2次,每次煎煮时间为60 min。
文章来源:《高压物理学报》 网址: http://www.gywlxbzz.cn/qikandaodu/2021/0623/561.html